大鼠嗜堿性粒細胞性白血病細胞；RBL-1復(fù)蘇操作流程
大鼠嗜堿性粒細胞性白血病細胞；RBL-1復(fù)蘇操作流程:
1. 準備工作，開水浴鍋，預(yù)熱試劑，超凈工作臺紫外照射 30min,找到對應(yīng)細胞在液氮罐中的位置
2. 紫外照射后風(fēng)機吹 10min 后，酒精擦拭臺面，放入試劑和離心管，取 15ml 離心管，加入 9ml 培養(yǎng)液
3. 在液氮罐中取出細胞，先擰松放液氮，再擰緊，將凍存管放入 PE 手套中，然后水浴融化后取出，1-2min
4. 將凍存管噴酒精后放入超凈臺內(nèi)，擦干管壁，用 1ml 頭將細胞轉(zhuǎn)移到已加培養(yǎng)液的離心管中
5. 800-1000rpm 離心 5min,注意配平
6. 將離心好的細胞棄上清，加入 5ml *培養(yǎng)基重懸，用移液管吹打 8-10 次， 避免產(chǎn)生氣泡，將細胞懸液接種到 10cm 培養(yǎng)皿中，補加 5ml 培養(yǎng)液
7. 混勻，十字法或者 8 字法
8. 將混好的細胞放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 冷凍保存方法一：冷凍管置于4℃300分鐘→(-20℃30分鐘*)→-80℃16~18小時(或隔夜)→液氮槽儲存。
冷凍保存方法二：冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3℃至–80℃以下，再放入液氮槽期儲存。-20℃不可超過1小時，以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，也可跳過此步驟直接放入-80℃冰箱中，但存活率稍微降低一些。
GV3101(pSoup)感受態(tài)細胞(化學(xué)轉(zhuǎn)化法或熱激法）
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EHA105感受態(tài)細胞(化學(xué)轉(zhuǎn)化法或熱激法）
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LBA4404感受態(tài)細胞(化學(xué)轉(zhuǎn)化法或熱激法）
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